LC-MS(液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用)方法開發(fā)指南如下:
1. 明確目標和要求:首先,確定分析的目標和要求,包括待測物的性質(zhì)、濃度范圍、分離和檢測的要求等。
2. 選擇合適的液相色譜條件:根據(jù)待測物的性質(zhì),選擇合適的液相色譜條件,包括色譜柱、流動相、流速、梯度等。要確保待測物在色譜柱上有良好的分離效果,同時盡量減少雜質(zhì)的干擾。
3. 優(yōu)化質(zhì)譜條件:根據(jù)待測物的性質(zhì),優(yōu)化質(zhì)譜條件,包括離子源、掃描模式、電壓、溫度、離子對等。要確保待測物在質(zhì)譜上有良好的響應(yīng)和穩(wěn)定性,同時盡量減少背景噪聲的干擾。
4. 確定定性和定量方法:根據(jù)待測物的性質(zhì)和分析要求,確定定性和定量方法。常用的定性方法包括分子量確認、結(jié)構(gòu)式確認等;常用的定量方法包括外標法、內(nèi)標法等。
5. 驗證方法:通過實際樣品的測定,驗證所開發(fā)方法的準確性和可靠性??梢允褂脴藴势坊蛞阎獫舛鹊臉悠愤M行驗證,比較測定結(jié)果與理論值的差異,評估方法的準確性和精密度。
6. 優(yōu)化方法:根據(jù)驗證結(jié)果,進一步優(yōu)化方法,提高分析的準確性和靈敏度??梢酝ㄟ^調(diào)整色譜和質(zhì)譜條件、優(yōu)化樣品前處理方法等手段進行優(yōu)化。
7. 建立標準操作程序(SOP):將所開發(fā)的方法標準化,建立標準操作程序,確保分析過程的可重復(fù)性和可靠性。SOP應(yīng)包括樣品前處理、色譜和質(zhì)譜條件、定性和定量方法等步驟。
總之,LC-MS方法開發(fā)需要綜合考慮待測物的性質(zhì)、分析要求、儀器性能等因素,通過不斷優(yōu)化和驗證,建立準確、可靠的分析方法。